中国汉族散发性激素耐药型肾病综合征儿童M

本文原载于中华儿科杂志年7期

原发性肾病综合征(primarynephroticsyndrome，PNS)是儿童时期常见的肾小球疾病。30%～40%的激素耐药型肾病综合征(steroid-resistantnephroticsyndrome，SRNS)患儿在10年内进展至终末期肾脏疾病(endstagerenaldisease，ESRD)[1,2,3]。肾脏病遗传学研究表明20多个不同的单基因(如NPHS1、NPHS2、WT1、CD2AP、PLCE1、MYO1E基因等)突变可导致SRNS[3,4,5,6,7]。MYO1E基因定位于人染色体15q21-22，有28个外显子；其编码蛋白myosin1e含有位氨基酸，参与胞吞、细胞信号传导、细胞膜性结构张力维持等基于actin纤维的各种细胞活动[8,9,10,11,12]。MYO1E基因突变可导致常染色体隐性遗传型SRNS/局灶节段性肾小球硬化(focalsegmentalglomurularsclerosis，FSGS)[6,7]。为探讨中国汉族SRNS患儿MYO1E基因突变及其特点，年6月至年12医院儿科对收住院的54例中国汉族散发性SRNS患儿进行了MYO1E基因突变分析。

对象和方法

一、研究对象

1．病例入选标准：

(1)发病年龄3个月～18岁；(2)临床诊断为SRNS[13]；(3)汉族人，父母非近亲婚配，无肾脏疾病家族史。

2．病例排除标准：

(1)链球菌感染后肾小球肾炎、紫癜性肾炎、IgA肾病、狼疮性肾炎、乙型肝炎病毒相关性肾炎和其他全身性疾病所致的肾病综合征；(2)NPHS2和WT1基因突变所致的病例。

同时符合病例入选和排除标准的SRNS患儿54例(表1)，其中男37例，女17例，年龄4.42岁(0.4～12.7岁)；单纯型23例，肾炎型31例。肾活检20例，肾脏病理为FSGS11例、微小病变型肾病4例、系膜增生性肾小球肾炎3例、膜性肾病1例、弥漫性系膜硬化1例。16例(30%)SRNS患儿经激素和(或)免疫抑制剂(6例只应用激素治疗)，尿蛋白持续阳性，肾病无缓解，38例(70%)经激素和(或)免疫抑制剂(1例只应用激素治疗)，尿蛋白转阴，肾病缓解；随访时间1～.6个月，存活33例，死亡11例，失访10例。对照组为59名尿检正常的健康志愿者，其中男38名，女21名，年龄18～46岁。

二、研究方法

1．基因组DNA提取：在获医院伦理委员会批准和征得患儿监护人及对照人群知情同意的情况下，取所有研究对象外周静脉血3ml，10%枸橼酸钠抗凝，用E.Z.N.A.?SEBloodDNA试剂盒(美国Omega)提取基因组DNA。

2．PCR及DNA测序：扩增MYO1E基因外显子1～28采用Mele等[6]设计的引物。应用ABIXLDNAAnalyzer测序仪进行测序。对PCR产物进行正向和反向测序。对测序结果异常的DNA片段进行重新扩增，至少重复2次，以验证结果的可靠性。

3．DNA序列变异命名：根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)的GenBank获得MYO1E基因组序列(NC_.9)、mRNA序列(NM_.3)和蛋白质序列(NP_.2)，按照人类DNA序列变异命名建议命名MYO1E基因变异[14]。

4．限制性片段长度多态性PCR(RFLP-PCR)分析法：采用相应的限制性内切酶对携带新发现MYO1E基因变异的患儿、父母及正常对照者相应外显子PCR产物进行酶切电泳分析。

5．应用ClustalOmega软件(

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